反相液相色谱法测定食品中的苏丹红1号

反相液相色谱法测定食品中的苏丹红1号
甘源，赵舰， 肖义夫，王正虹，顾万江
[摘要] 目的：建立反相液相色谱法测定食品中的苏丹红1号的方法。方法：食品中的苏丹红1号经乙醇提取
后用反相液相色谱一二极管阵列检测器（DAD）测定。结果：该方法线性范围从0．5～1000 fig／m1，标准差为0．18，
相对标准偏差为0．73％，平均回收率为95．43％，zui低检出限为0．2 ng，zui低检出浓度为0．02 mg／kg。人工合成色素（柠
檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝、靛蓝、靛蓝）不干扰其测定。结论：该方法线性范围广、精密度高、准确度好、
选择性强，完满足食品中苏丹红1号的定性定量分析。
[关键词] 反相液相色谱；食品；苏丹红1号
[中图分类号】R122．7 [文献标识码]A [文章编号】1003—8507（2005）12—1760—02
TO Dj朗：嘲’THE SUDAN I IN FOOD USING METHOD OF RE—HI'LC．GAN Yuan，ZHAO Jian，XIAO Yi— ，et a1．
Centrofor Disease Control and Prevention ofChongqing Gty，Chongqing，400042．
Abstaet：Objective：Toevaluatethemethxt of detection of Sudan I infoodsbased OI3．theuseof RE—HPU ．Methods：Sudan
1 in foods were detected by re-HPLC—DAD after extracted by alcoho1．Results：This method could detect Sudan I in samples ef—
fectlvdy while its eoneentrat~on va．~ed from 0．5~g／rnl to 1 000 I-tg／m1．The stan dard deviation WaS 0．18．relative standard devia—
tion was 0．73％ ，an d average recovery Was 94．43％ ． 0．2 ng was observed as its detection limit，while the concentration limit Was
0．2mg／Kg．Artificial synthesized pigments hadI10disturbanceintheprocess．Conclusion：Thismethodisvalidatedintdh ofdetection
limitS，linearity，sensitivity，accuracy an d selectivity in detection of Sudan I in foods．
Keywords：Re—HPLC；Foods；Sudan 1
苏丹红1号化学名称为1一偶氮苯基一G一萘酚，是用于溶解剂、油彩、蜡、地板蜡、机油、鞋油、香皂等化工产品中的一种非生物合成着色剂，不溶于水易溶于有机溶剂乙醇、乙腈、氯仿等，分子式：CJ6Hl2 N20，分子量：248。本品具有致癌性，国内外有关规定均严禁在食品中使用苏丹红1号。
1 材料与方法
1．1 原理苏丹红1号染ls}经乙醇提取后，超滤，滤液经液相色谱Cl8柱分离，用二极管阵列（DAD）检测器在478c丌1处进行检测，以保留时间定性，以峰高或峰面积定量。
1．2 仪器与试剂
1．2．1 乙腈（色谱纯）、水（超纯水，其电阻率>18．2Mf1）、冰醋酸（分析纯）、无水乙醇（分析纯）
1．2．2 标准贮备溶液精密称取0．1000 g苏丹红1号标准品（分析纯），以乙醇溶解并转人100ml容量瓶中，并以乙醇稀释定容至刻度，即为1 g／L的标准贮备液。标准系列的配制：用：丕步稀释法将乙醇稀释为0、0．5、[作者单位]重庆市疾病预防控制中心，重庆，400042
[作者简介]甘源（1972-），女，本科，主管技师，主要从事食品卫生检验工作．
1．0、2．0、4．0、10．0及20．0~g／mL的标准系列。

1．2．3 仪器液相色谱仪：AgilentlO00型，具DAD检测器，Agilent ZORBAX Cl8柱（150 C'ft×4．6 rnnl，3／an）、万分之一天平、超声波萃取仪
1．3 样品前处理样品制备：将采集样品放入一个容量较大的密闭容器中混合均匀。对于固体样品要用打浆机或粉碎机磨细。
1．3．1 甜椒或红辣椒粉称取10 g（准确至0．01 g）样品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
1．3．2 粉状调味品称取5 g（准确至0．01 g）样品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
1．3．3 调味辣椒酱、原味辣椒酱、辣椒油等，称取20 g（准确至0．01g）样品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
1．3．4 肉及肉制品称取20 g（准确至0．01 g）样品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
以上样品经超声提取1 h后过滤于三角瓶中，如果滤液浑浊，则取滤液于12000 r／min离心10 min，滤液根据待测物含量的高低进行浓缩或稀释，测定前取一部分过0．45岬膜，滤液待测。
1．4 色谱条件流动相：0．1％ （体积分数）乙酸+乙腈=20+80：

现代预防医学2oo5年第32卷第12期Modem Preventive Medicine，2oo5，vl01．32，2
色谱柱：Agilent ZORBAX Cl8柱（150 cn1×4．6咖，3／an），柱温：常温；流速：1．0 ml／min，恒流；二极管阵列检测器，检测波长：478 nln，峰宽40 nln，参考波长360 nln，峰宽100 nm；
进样量：10 l。
1．5 方法将配制好的标准系列及处理好后的样品于上述色谱条件下测定，标准色谱图见图1，样品色谱图见图2。
图1 标准色谱图
图2 样品色谱图
2 结果与讨论
2．1 线性范围的测定
2．1．1 标准系列1的测定将0、0．50、1．0、2．0、4．0、10．0、20．0 gg／ml的标准系列，每个标准进10 分析，测定结果见表1。
表1 标准系列1的测定结果
标准浓度（gg／mL） 0 0．50 1．0 2．0 4．0 10．0 20．0峰面积（roAU*S） 0 1．12 2．85 4．85 9．72 24．57 48．69以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。回归方程：y=2．43x+0．076；
a=0．076，b=2．43；7=0．99992．1．2 标准系列2的测定 将0．20．0、50．0、100．0、
200．0、500．0及1000．0~g／ml的标准应用液，每个进10 1分析，测定结果见表2。
表2 标准系列2的测定结果

面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
回归方程：y=2．53x一10．17；
a=10．17，b=2．53；7=0．9999
由上述结果可知，在0．5 ～1000~g／ml范围内线性良好。
2．2 精密度试验分别取1、10和40 pg／mL标准应用液每个浓度重复测定9次，其标准差分别为：0．040、0．18和0．30；相对标准偏差（变异系数）为：1．41％、0．73％和0．31％；测定结果见表3。
表3 3个浓度精密度试验结果（gg／m1）
2．3 准确度试验于样品中分别加入2．0，10及40 vg／ml苏丹红1号标准，作加标回收试验，测定结果见表4。
表4 准确度试验结果（~g／m1）
2．4 zui低检出限的测定 实验测得其zui低检出限0．2 ng，如果样品取10 g，提取后zui后定容至10 rnl，进10 分析，则zui低检出浓度为0．02mg／kg。
2．5 提取溶剂的选择本方法选择了无水乙醇、乙腈作为萃取剂，经检测无水乙醇与乙腈的提取效果相同，本着经济、安全的原则，zui终确定选无水乙醇作的样品的提取溶剂。
两种溶剂的提取效果试验：分别选取3种不同性状的样品，均加入10~g／rnl的苏丹红1号标准溶液，分别用无水乙醇和乙腈提取，两种溶剂提取效果无差异，见表5。
表5 两种提取溶剂各样品的蜂面积（mAu*S）
2．6 干扰试验将样品中分别加入人工合成色素柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝、靛蓝等，均不干扰苏丹红1号测定，见图3。
图3 混合色素色谱图